Características

Activa en una amplia gama de productos de reacción.

Actividad específica: 40 U/mg de proteína.

Forma: Contiene 100 mg de proteinasa K, polvo liofilizado.

Active in a wide range of reaction products

Specific Activity: 40 U/mg protein

Form: Contains 100 mg Proteinase K, Lyophilized Powder

Aplicaciones

Aislamiento de ADN genómico de células y tejidos cultivados.

ELiminación de ADNasas y ARNasas al aislar ADN y ARN de tejidos o líneas celulares.

Determinación de la localización enzimática.

Mejora de la eficacia de la clonacion de productos de PCR

Control de Calidad

Actividad ADNasa: Ninguna actividad enzimática detectable con λ ADN después de 6 horas de incubación a 37ºC.

Actividad ARNasa: Ninguna actividad de ribonucleasa detectable después de 16 horas de incubación a 25ºC.

Fuente

Células de Pichia pastoris con un gen clonado que codifica la proteasa endolítica de Tririachium album (Proteinasa K).

Peso Molecular

28,9 kDa el monómero (6).

Dilution Buffer

50 mM Tris-HCl (pH 7.5), containing 5 mM calcium chloride and 50% (v/v) glycerol.

Definición de la unidad de actividad

Una unidad de enzima libera aminoácidos y péptidos Folina-positivos correspondientes a 1 µmol de tirosina en 1 min a 37 ° C utilizando hemoglobina desnaturalizada como sustrato. La actividad enzimática se determina en la siguiente mezcla: fosfato potásico 0,08 M ​​(pH 7,5), urea 5 M, NaCl 4 mM, CaCl2 3 mM y hemoglobina 16,7 mg / ml.

Almacenamiento

Para un almacenamiento prolongado, almacene la proteinasa K liofilizada a 4 ºC y el tampón de dilución a -20 ºC. Las soluciones disueltas deben almacenarse a -20 ºC.

Inhibición e inactivación

La proteinasa K no se inactiva por quelantes de metales, por reactivos con tiol ni por inhibidores específicos de tripsina y quimiotripsina.

Inactivado por calentamiento a 95ºC durante 10 minutos.

Nota

Actividad óptima de 50-55ºC.

La desnaturalización rápida de la enzima ocurre a temperaturas superiores a 65ºC.

La concentración de trabajo recomendada para la proteinasa K es de 0,05 a 1 mg/ml. La actividad de la enzima se estimula con SDS al 0,2-1% o con urea 1-4 M.

El Ca2+ protege la proteinasa K contra la autolisis, aumenta la estabilidad térmica y tiene una función reguladora para el sitio de unión al sustrato de la proteinasa K.

Estable en un amplio rango de pH: 4,0-12,5 ; pH óptimo 7,5-8,0.