Contenido (para uso de investigación solo)

Composición de SYBR Green qPCR Mix

KCl 100 mM, MgCl2 4 mM, dNTP 400 μM, ADN polimerasa Taq 0,1 U / μl, 1x SYBR® Green y otros componentes de tampón optimizados.

Aplicaciones

• PCR en tiempo real
• PCR en tiempo real RT-PCR

Características

• Este reactivo se puede utilizar en sistemas capilares de vidrio (p. Ej., LightCycler, Roche Molecular Systems, Inc.).
• Este reactivo se puede utilizar en un sistema de referencia pasivo (por ejemplo, ABI PRISM® 7700, Applied Biosystems, Inc.). El colorante pasivo de referencia no afecta a ningún otro sistema.
• La tecnología Hot Start con anticuerpos anti-Taq ADN polimerasa permite una alta especificidad y una amplificación reproducible.

Detección

• Este reactivo se puede utilizar en dispositivos de detección generales, como: LineGene (Bioer Technology co., Ltd.)
• Este reactivo también se puede utilizar en equipos de detección mediante capilares de vidrio o referencia pasiva, como:

LightCycler (Roche Molecular Systems)

ABI PRISM® 7000, 7700 y 7900 (Applied Biosystems)

Nota: El modo de referencia pasiva de los detectores debe establecerse en “ROX”.

Directrices para prevenir la contaminación de la reacción de PCR

Durante la PCR se generan más de 10 millones de copias de ADN molde. Por lo tanto, se debe tener cuidado para evitar la contaminación con otras plantillas y amplicones que puedan estar presentes en el entorno del laboratorio. Las recomendaciones generales para reducir el riesgo de contaminación son las siguientes:

• Prepare su muestra de ADN, configure la mezcla de PCR, realice ciclos térmicos y analice los productos de PCR en áreas separadas.
• Configure las mezclas de PCR en una cabina de flujo laminar equipada con una lámpara UV.
• Utilice guantes nuevos para la purificación del ADN y la preparación de la reacción.
• Utilice contenedores de reactivos dedicados a la PCR. Utilice pipetas de desplazamiento positivo o utilice puntas de pipeta con filtros de aerosol para preparar muestras de ADN y realizar la configuración de la PCR.
• Realice siempre reacciones de «control sin plantilla» (NTC) para comprobar si hay contaminación

Control de Calidad

La ausencia de endodesoxirribonucleasas, exodesoxirribonucleasas y ribonucleasas se confirma mediante pruebas de calidad adecuadas. Probado funcionalmente en la amplificación de un gen de copia única de ADN genómico humano.

Notas

El sistema contiene suficientes reactivos adecuados para 200 reacciones de amplificación de 50 μl de sistema de PCR.

Almacenamiento

Este reactivo se puede almacenar a 4 ° C durante 2 meses y protegido de la luz. Para un almacenamiento más prolongado, este reactivo debe mantenerse a -20 ° C y protegido de la luz.

Protocolo

P1061 P1062 2x SYBR Green qPCR Mix – Protocol