Kit de Extracción General de ARN (R1011,R1012)
Kit de Extracción General de ARN (R1011,R1012)
Este manual proporciona protocolos específicos de muestras para aislar el ARN total de una amplia gama de tipos y cantidades de muestras. En general, las muestras se lisan y luego se homogeneizan en presencia de isotiocianato de guanidinio, una sal caotrópica capaz de proteger el ARN de las ARNasas endógenas. Después de la homogeneización, se agrega etanol a la muestra. Luego, la muestra se procesa a través de un cartucho giratorio que contiene una membrana transparente a base de sílice a la que se une el ARN. Las impurezas se eliminan eficazmente mediante un lavado posterior. El ARN total purificado se eluye en agua (sin ARNasa) para poder utilizarse en una variedad de aplicaciones posteriores.
Contenido
| R1011 | R1012 | |
| Solución RL | 60 ml | 240 ml |
| Tampón de lavado RPI | 18 ml | 72 ml |
| Tampón de lavado RW | 12 ml | 48 ml |
| Agua tratada – DEPC | 10 ml | 40 ml |
Materiales que deben ser suministrados por los usuarios
- Cloroformo
- Etanol (96–100%)
Características
- Rendimiento estable
- Rendimiento confiable de ARN total purificado de alta calidad en aplicaciones posteriores
Aplicaciones
- PCR en tiempo real (RT-PCR)
- PCR cuantitativa
- Northern blot
- Ensayos de “Nuclease protection”
- Amplificación de ARN para análisis de microarrays
- Preparación de bibliotecas de ADNc tras la selección de poly(A)+
Almacenamiento
Almacenar a 2-8 ºC, proteger de la luz. Los contenidos del kit son estables hasta los 12 meses, si se almacena correctamente.
Notas
El tampón de lavado RPI y el tampón de lavado RW se suministran como concentrados. Antes de usarlo por primera vez, agregue etanol (96-100% grado de pureza) como se indica en la botella para obtener una solución de trabajo.
- Utilice artículos de plástico estériles, desechables y envueltos individualmente.
- Utilice únicamente puntas de pipeta y tubos de microcentrífuga estériles y desechables sin ARNasa.
- Utilice guantes desechables al manipular reactivos y muestras de ARN para evitar la contaminación por ARNasa de la superficie de la piel.
- Se ha de cambiar con frecuencia los guantes, especialmente a medida que el protocolo avanza de extractos crudos a material más purificado.
- Utilice siempre técnicas microbiológicas asépticas adecuadas cuando trabaje con ARN.
- Volumen recomendado para la solución RL:
| 10 cm² células adherentes | 1 ml |
| 107 células en suspensión | 1-2 ml |
| 100 μl leucocitos | 2 ml |
| 50-100 mg tejido normal | 1 ml |
| 50-100 mg tejido normal (hígado, bazo, hueso o cartílago) | 2 ml |
| 15-30 mg tejido vegetal | 1 ml |
Protocolo
| Nº preparaciones | 50 preps (R1011), 200 preps (R1012) |
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