Miniprep para plásmidos de alta calidad (D1031,D1032)
Miniprep para plásmidos de alta calidad (D1031,D1032)
Este kit está diseñado para una preparación rápida, económica y a pequeña escala de plásmidos de ADN de alta calidad a partir de cultivos recombinantes de E.coli. El kit utiliza una exclusiva tecnología basada en membranas de sílice en forma de una adecuada columna de centrifugación. Cada columna de centrifugación puede recuperar hasta 40 μg de ADN plasmídico. El kit puede ser utilizado para la purificación eficiente de cualquier tamaño de plásmido o cósmido con éxito. El rendimiento del plásmido y el volumen óptimo para el cultivo depende del número de copias del plásmido y del medio usado en el cultivo.
Contenido
| Componente | D1031 | D1032 |
| RNasa A | 150 μl | 300 μl |
| Solución de resuspensión | 15 ml | 30 ml |
| Solución de lisis | 15 ml | 30 ml |
| Solución de neutralización | 20 ml | 40 ml |
| Tampón de lavado (PB) | 30 ml | 60 ml |
| Tampón de lavado (W) | 30 ml | 30 ml x 2 |
| Tampón de elución (10 mM Tris-HCl, pH 8.5) | 5 ml | 10 ml |
| Columnas de centrifugación | 50 | 100 |
Almacenamiento
Almacenar la ARNasa A a -20ºC
Todo el kit, a excepción de la ARNasa A, puede conservarse hasta 12 meses a temperatura ambiente (15-25ºC) o a 4ºC para un almacenamiento de más de 12 meses.
Si se forman precipitados en algún tampón durante su almacenaje, se debe redisolver mediante su incubación a 37ºC antes de su uso.
Después de la adición de ARNasa A, el tampón de resuspensión puede usarse durante 6 meses si se conserva a 4ºC.
Principio
El pellet de células bacterianas es resuspendido y sometido a lisis SDS/alcalina (1) para liberar el ADN plasmídico. El lisado resultante es neutralizado para crear las condiciones adecuadas para la unión del ADN plasmídico en la membrana de sílice de la columna de centrifugación (2). Los restos celulares y el SDS precipitado forman un pellet por la centrifugación, y el sobrenadante que contiene el ADN plasmídico es cargado en la membrana de la columna de centrifugación. El ADN adsorbido es lavado para eliminar contaminantes, y luego es eluido con un pequeño volumen de tampón de elución (10 mM Tris-HCL, pH 8.5). El ADN plasmídico purificado está listo para su uso inmediato en procesos de biología molecular como digestión convencional con enzimas de restricción, PCR, transformación y secuenciación automática.
Referencias
- Birnboim H.C., and Doly, J. (1979) A rapid alkaline lysis procedure for screening recombinant plasmid DNA. Nucleic Acids Res. 7, 1513 -1522.
- Vogelstein, B. and Gillespie, D. (1979) Preparative and analytical purification of DNA from agarose. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 76, 615-619.
Protocolo
| Número de preparaciones | D1031 (50 preps), D1032 (100 preps) |
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