Componentes

Características

Alta pureza: A260/A280=1,7-1,9. Sin cloroformo o fenol, lo que es seguro para las personas.

Principio

Debido a la presencia de una pared celular más resistente a la presente en E.coli, el método de aislamiento de ADN plasmídico utilizado normalmente en la levadura Saccharomyces cerevisiae son más difíciles y producen un menor rendimiento de ADN en comparación con métodos de aislamiento de plásmidos. bacteriasnos.

En nuestro protocolo, llevamos a cabo un paso inicial en el que se elimina la pared celular de la levadura para así obtener protoplastos de la levadura. A partir de los protoplastos, utilizamos el kit Yeast Plasmid DNA Purification kit para aislar el ADN plasmídico de la levadura.

Primero usamos una liticasa para digerir la pared celular de la levadura y obtener los protoplastos. Los protoplastos forman un pellet que es resuspendido y sujeto a lisis mediante SDS/alcalina para liberar el plásmido del ADN. El liso resultante es neutralizado para crear las condiciones apropiadas para la unión del ADN plasmídico a la membrana de sílice de la columna de centrifugación. Los restos celulares y los precipitados de SDS forman un pellet por centrifugación, y el sobrenadante que contiene el ADN plasmídico es cargado en la membrana de la columna de centrifugación. El ADN adsorbido es lavado para eliminar contaminantes, luego se eluye con un pequeño volumen de tampón de elución (Tris-HCl 10 mM, pH 8,5). El ADN plasmídico purificado está listo para su uso inmediato en procesos de biología molecular tales como digestión por enzimas de restricción, PCR, transformación y secuenciación automática.

Protocolo

D1081 D1082 D1083 Kit de minipreparación de plásmidos de levadura: protocolo