Características

Actividad Específica: >2500 u/mg proteína (>50 Kunitz unidades/mg proteína).

Solo para uso de investigación.

Almacenamiento

Almacenar a -20℃.

Aplicaciones

–Preparación de plásmidos y ADN genómico.

–Eliminación de ARN de preparaciones de proteínas recombinantes.

–Ensayos de protección de ribonucleasas.

–Mapeo de mutaciones de una sola base en ADN o ARN.

Fuente

Páncreas bovino.

Peso molecular

13,7 kDa monómero.

Definición de unidad de actividad

Una unidad de la enzima provoca un aumento en la absorbancia de 1,0 a 260 nm cuando el ARN de levadura de hidroliza a 37 ºC y pH 5,0.

El ARN es hidrolizado a 37 ºC y pH 5,0.

Cincuenta unidades equivalen aproximadamente a 1 unidad Kunitz.

Tampón de Almacenamiento

La enzima se envía en: Tris-HCl 50 mM (pH 7,4) y glicerol al 50% (v / v).

Control de Calidad

Se ha determinado por las pruebas de calidad pertinentes la ausencia de  endo-desoxirribonucleasas, exo-desoxirribonucleasas y proteasas. Se ha determinado la funcionalidad de la digestión de ARN por medio de la purificación de ADN.

Inhibición e Inactivación

Inhibidores: el inhibidor más potente es una proteína de ~50 kDa del citosol de células de mamíferos, por ejemplo, RiboLock ™ RNase Inhibitor.

Otros inhibidores: uridina 2’,3’-vanadato cíclico, 5′-difosfo adenosina 3′-fosfato y 5′-difosfoadenosina 2′-fosfato, SDS, pirocarbonato de dietilo, tiocianato de guanidinio 4M más 2-mercaptoetanol 0,1 M e iones de metales pesados.

Inactivado por extracción con fenol / cloroformo.

Notas

La concentración de trabajo para RNAsa A es de 1-100 µg / ml dependiendo de la aplicación.

La enzima es activa en una amplia gama de condiciones de reacción. A bajas concentraciones de sal (NaCl de 0 a 100 mM), la ARNasa A escinde el ARN monocatenario y bicatenario así como la cadena de ARN en híbridos ARN-ADN. Sin embargo a concentraciones de NaCl de 0,3 M o superiores, la ARNasa A escinde específicamente el ARN monocatenario.