Características

Contenido: ARNasa A 100 mg

Actividad Específica: >2500 u/mg proteína (>50 Kunitz unidades/mg proteína).

Contiene 100 mg ARNasa A, Polvo Liofilizado

Aplicaciones

–Preparación de plásmidos y ADN genómico.

–Eliminación de ARN de preparaciones de proteínas recombinantes.

–Ensayos de “Ribonuclease Protection”.

–Mapeo de mutaciones de una sola base en ADN o ARN.

Almacenamiento

Estable a temperatura ambiente durante 1 año. Para almacenamiento prolongado, almacenar la ARNasa A liofilizada a 4 ºC.

Control de Calidad

Se ha determinado por las pruebas de calidad pertinentes la ausencia de  endo-desoxirribonucleasas, exo-desoxirribonucleasas y proteasas. Se ha determinado la funcionalidad de la digestión de ARN por medio de la purificación de ADN.

Peso molecular

13,7 kDa monómero.

Definición de unidad de actividad

Una unidad de la enzima provoca un aumento en la absorbancia de 1,0 a 260 nm cuando el ARN de levadura de hidroliza a 37 ºC y pH 5,0.

Cincuenta unidades equivalen aproximadamente a 1 unidad Kunitz.

Inhibición e Inactivación

Inhibidores: el inhibidor más potente es una proteína de ~50 kDa del citosol de células de mamíferos, por ejemplo, RiboLock ™ RNase Inhibitor.

Otros inhibidores: uridina 2’,3’-vanadato cíclico, 5′-difosfo adenosina 3′-fosfato y 5′-difosfoadenosina 2′-fosfato, SDS, pirocarbonato de dietilo, tiocianato de guanidinio 4M más 2-mercaptoetanol 0,1 M e iones de metales pesados.

Inactivado por extracción con fenol / cloroformo.

Notas

La concentración de trabajo para RNAsa A es de 1-100 µg / ml dependiendo de la aplicación.

La enzima es activa en una amplia gama de condiciones de reacción. A bajas concentraciones de sal (NaCl de 0 a 100 mM), la ARNasa A escinde el ARN monocatenario y bicatenario así como la cadena de ARN en híbridos ARN-ADN. Sin embargo a concentraciones de NaCl de 0,3 M o superiores, la ARNasa A escinde específicamente el ARN monocatenario.